细胞培养步骤包括以下三个主要环节：预培养、传代和冻存。

预培养：首先将细胞移到含有细胞培养基的培养皿中，尽可能地使其接触到培养基。

然后在一个恒温、湿度适宜的环境中培养，为细胞取得更好的生长条件。

传代：当细胞密度达到一定程度时，需要将细胞分离并进行传代。

将细胞培养液倒出，以PBS、EDTA或胰酶等方法使细胞脱离基质，然后进行细胞计数，根据所需细胞数将细胞分装到新的培养皿中。

冻存：通过低温保存，以便在以后使用。

需要选择适合细胞保存的冻存液，并严格控制温度。

在加入冻存液之前，必须将无菌液体避免气泡出现，以免液体温度波动影响细胞的生存。