cas9蛋白

Cas9蛋白相当于限制酶，当Cas9蛋白与水稻TMS5基因结合后，使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。然后插入碱基A，并将两个片段在DNA连接酶作用下得到编辑成功的TMS5基因。 通过PCR技术扩增编辑成功的TMS5基因，需要根据一段已知目的基因的核苷酸序列合成引物。然后在基因的上游连接启动子，可作为RNA聚合酶识别和结合的部位，再组装到相应的载体上，除此之外...

此系统的工作原理是crRNA（CRISPR-derivedRNA）通过碱基配对与tracrRNA（trans-activatingRNA）结合形成tracrRNA/crRNA复合物，此复合物引导核酸酶Cas9蛋白在与crRNA配对的序列靶位点剪切双链DNA。而通过人工设计这两种RNA，可以改造形成具有引导作用的sgRNA（singleguideRNA），足以引导Cas9对DNA的定点切割。...